激光捕獲顯微切割顯微鏡（LCM）是一種結(jié)合激光技術(shù)與顯微鏡優(yōu)勢，用于從組織切片中精準分離和收集特定細胞或組織區(qū)域的技術(shù)，其技術(shù)步驟如下：
一、準備工作
樣本準備：
選擇適合的組織或細胞樣本，并進行適當?shù)氖占吞幚怼?nbsp;
使用適當?shù)墓潭▌ㄈ绺栺R林）固定樣本，防止組織退化。
將樣本切割成薄片，通常厚度為5-10微米，以便于觀察。
將切片放置在預(yù)處理的載玻片上，確保切片平整且無氣泡。
染色（可選）：
根據(jù)需要對切片進行染色，如H&E染色、免疫組織化學染色等，以便更好地識別目標細胞。
顯微鏡調(diào)節(jié)：
將切片放置在顯微鏡下，調(diào)整顯微鏡的放大倍率，確保能清晰地觀察到目標細胞或組織區(qū)域。
二、激光設(shè)置與定位
激光設(shè)置：
根據(jù)需要設(shè)置適當?shù)募す夤β屎徒咕啵源_保激光能夠精準地切割目標區(qū)域。
激光波長通常在紫外或紅外范圍內(nèi)，可以與不同的樣本類型進行兼容。
定位目標區(qū)域：
通過顯微鏡實時觀察，定位需要捕獲的目標區(qū)域。
操作人員可以通過圖像來確定目標區(qū)域的形狀和大小，并確保其周圍區(qū)域清晰可見。
三、激光切割與捕獲
激光切割：
使用激光束直接切割目標區(qū)域的組織。
激光切割過程會將切割的組織區(qū)域加熱，形成蒸汽壓力，進而分離該區(qū)域。
激光可精確地去除目標細胞或組織，避免損傷周圍細胞。
捕獲目標細胞或區(qū)域：
在激光切割的同時，使用一種透明的聚合物膜（如聚乙烯醇膜或乙烯乙酸乙烯酯膜）覆蓋在目標區(qū)域上。
激光束照射聚合物膜底部，使其軟化并產(chǎn)生黏附力，黏附目標組織或細胞于膜上。
待膜冷卻后，與目標細胞或組織形成牢固的聚合物，從而使其與周圍組織或細胞分離。
四、收集與后續(xù)分析
收集切割區(qū)域：
被切割的組織或細胞通過激光系統(tǒng)被收集到微小的塑料捕獲帽或收集杯中。
這些容器通常可以包含用于進一步分析的溶液，如裂解液或消化緩沖液。
RNA/DNA/蛋白質(zhì)提取：
從捕獲的細胞或組織區(qū)域中提取RNA、DNA或蛋白質(zhì)，用于后續(xù)的分子生物學分析。
這些提取物可用于qPCR、基因組測序、RNA-seq、Westernblot等實驗。
數(shù)據(jù)分析：
通過對提取物的進一步分析，研究人員可以獲得關(guān)于目標細胞群體或區(qū)域的詳細分子信息，如基因表達譜、突變分析等。
分析數(shù)據(jù)可以通過高通量技術(shù)（如基因表達芯片、RNA-seq等）獲得被捕獲細胞的分子特征，進行差異分析或功能注釋。
五、驗證與設(shè)備維護
驗證實驗：
通常會進行驗證實驗，如免疫熒光染色、原位雜交等，以驗證激光切割獲取的樣本是否代表了目標區(qū)域或細胞的特征。
設(shè)備清潔與軟件更新：
定期對激光切割設(shè)備和顯微鏡進行清潔，以確保其正常運行。
檢查并更新相關(guān)軟件，以保持數(shù)據(jù)處理和分析的準確性。
